JMT日本神经干细胞：鉴定和分离方法的发展以及通过移植恢复神经功能的尝试②

　　2.神经干细胞的分离

　　那么，怎么样才能得到神经干细胞和神经系统的祖细胞呢?在神经干细胞中，虽然存在RC2、结合蛋白、巢蛋白等具有高选择性的标记分子，但因为这些分子不是细胞表面抗原，与造血系统的干细胞不同，到目前为止无法用细胞筛选器(FACS)在神经干细胞还活着的状态下鉴定前瞻性。作为我们在神经干细胞再生状态下前瞻性鉴定的第一步尝试，我们制作了一种在神经干细胞选择性高的基因控制下发现荧光分子enhanced green fluorescent protein(EGFP)的基因转殖鼠，并使用FACS(florescence-activatedcell sorter)，根据表达强度(即荧光强度)分离出EGFP发育细胞。利用分裂能(BrdU的吸收)，神经球形成效率和低密度培养法，对分离后细胞的神经干细胞的活性进行了研究。捕捉到GFP的荧光强度与作为细胞的神经干细胞的活性相关联的。由于不通过使用传统增生因子的培养方法，通过FACS可以浓缩神经干细胞，所以可以进行以前几乎被忽视的神经干细胞的时期以及区域特异性等生物学的分析。此外，通过利用GFP的荧光能够识别处于存活状态的神经干细胞，这与神经干细胞的增殖和分化有关，包括迄今为止尚未脱离虚拟范围的“抑制机制”。这将是将来分析目标和外部因素的一种非常有效的方法。也可以通过脂转染将相同的转基因转化为成人海马细胞，并使用FACS分离神经系统祖细胞。